亚洲精品国产综合久久一线

<td id="fn4t9"><ruby id="fn4t9"></ruby></td>
<p id="fn4t9"></p>

      1. 歡迎您訪問上海吉熒生物技術有限公司官方網站...
      2. 產品分類
        CRISPR/Cas9基因敲除敲入
        shRNA/sgRNA載體構建,活性篩選
        siRNA
        miRNA
        mRNA合成、sgRNA合成
        蛋白表達分子細胞實驗/新冠
        病毒包裝
        質粒及載體構建
        精選試劑
        科研儀器
        優勢服務

        sgRNA設計、高效率靶點載體構建、活性篩選

        貨號 名稱 單位 價格
        JYSG-1 單靶點構建 詢價
        JYSG-2 sgRNA套餐 詢價
        JYSG-3 sgRNA文庫設計合成構建(已完成人,鼠,豬,牛、羊,油菜,水稻等全庫或部分文庫的合成構建) 詢價

        1、根據客戶提供的基因信息,設計并構建至少3條或3對cas9/sgRNA表達載體,在293細胞或目的細胞中進行活性篩選,最后提交錯配酶切結果及構建好的sgRNA表達載體。

         

        圖:sgRNA活性篩選T7E1測試結果

        2、高效率靶點載體構建(適用于哺乳動物細胞)

        (新穎的cas9表達系統,高效的編輯效率,省時,省費用?。?/strong>

        CRISPR/Cas9基因編輯,即Cas9酶在gRNA引導下,靶向基因組并剪斷DNA,形成DNA雙鏈斷裂(DSB),細胞通過NHEJ和HDR兩種方式對DSB進行修復,進而產生片段或堿基缺失,插入,替換等,利用該特點進行基因敲除(KO)和敲入(KI)。改造后的CRISPR/Cas9還可以實現基因激活、抑制和表觀遺傳調控等。

        細胞基因編輯中幾個重要的影響因素:

        1、        合適的Cas9酶和gRNA表達系統(哺乳動物可選擇表達系統較多)

        2、        設計篩選到高活性gRNA靶點(一般設計3-6個靶點進行篩選,費時步驟)

        3、        CRISPR質粒的導入(轉染效率低的細胞編輯效率很低,實驗很難進行)

        4、        單克隆篩選(如果編輯效率低,將更加費時費力)

        吉熒生物提供新型CRISPR 表達系統,上述問題迎刃而解!

        原理:該載體是一種可以在細胞中復制的載體,就像普通質粒在細菌中復制一樣。高效CRISPR質粒上包含了所有基因編輯元件和篩選基因,屬于All-In-One vector,使用非常簡單,只要將質粒轉入細胞中,用嘌呤霉素篩選幾天就可以敲除基因,效率可高達100%(見下圖)。

        高效CRISPR的優點總結如下:
        1. 可以長時間編輯細胞,實現高效的基因敲除
        2. 載體含有Puromycin抗性基因,可以富集轉染成功的細胞,不受轉染效率影響
        3. 載體含有GFP,可以監測轉染效率,還可以用流式分選細胞
        4. 載體可以同時表達兩個gRNA,編輯兩個基因或者敲除一段DNA片段
        5. 撤除篩選藥物后,高效表達質粒在一周內迅速丟失,編輯好的細胞不再含有外源基因

        載體圖及案例展示

        第15天獲得接近100%的編輯效率?。盖形稽c的突變)

        訂購注意事項:

        1、        您提供基因名稱(基因ID)

        2、        我們提供構建好gRNA靶點的高效CRISPR載體(含puro,GFP雙篩選標記)

        周期約10工作日

         

        參考文獻:[1] Xie et al. An episomal vector-based CRISPR/Cas9 system for highly efficient gene knockout in human pluripotent stem cells. Sci Rep. 2017 May 24;7(1):2320.

        亚洲精品国产综合久久一线