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      2. 產品分類
        CRISPR/Cas9基因敲除敲入
        shRNA/sgRNA載體構建,活性篩選
        siRNA
        miRNA
        mRNA合成、sgRNA合成
        蛋白表達分子細胞實驗/新冠
        病毒包裝
        質粒及載體構建
        精選試劑
        科研儀器
        優勢服務

        ECL發光液、CCK8 優勢制劑

        一、ECL發光液(AB液)

        產品介紹

        用于辣根過氧化物酶(HRP)標記的蛋白或核酸檢測。

        超300家實驗室應用3年,從未想過更換!

        主要特點

        超靈敏 ECL含獨特的發光增強劑,發光靈敏度高出Pierce公司SuperSignal West Pico試劑8倍以上,高出Amersham ECL試劑150倍以上。

        超穩定protein lightTM ECL含獨特的發光穩定劑,4℃儲存1年以上,信號強度不變。

        低背景protein lightTMECL含精準的發光底物,提高信噪比110倍以上,靈敏度更高背景卻更低。

        信號強protein lightTM有獨特的發光配方,發光時間長達幾小時以上,輕松進行曝光操作。

                                        其他試劑 prolightTM                                                         其他試劑 prolightTM

        貨號

        規格

        價格

        ECL-100

        100ml

        450

         

         

        二、CCK8 試劑盒

        產品介紹

        Cell Counting Kit 8簡稱CCK8試劑盒,是用于測定細胞增殖或毒性實驗中活細胞數目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。

        CCK8屬于MTT的升級產品,CCK8溶液可以直接加入到細胞樣品中,不需要預配各種成分,檢測快速,毒性非常低。CCK8基于水溶性四唑鹽WST8。工作原理為:WST8在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜染料。甲臜染料能夠溶解在組織培養基中,與活細胞數量成正比。通過比色,可以動態地量化活細胞的數量,從而對細胞增殖或藥物毒性進行檢測本試劑盒通常用于貼壁或懸浮細胞的周期與凋亡檢測。如果用于組織,則需要把組織消化成單細胞狀態,再可以進行檢測。

        主要特點

        最快速(即開即用)、準確(很低毒性,穩定)的細胞增殖檢測方法。

        檢測方法

        MTT

        XTT

        WST-1

        CCK

        甲臜產物的水溶性

        差(需加有機溶劑溶解再檢測)

        產品性狀

        粉末

        2瓶溶液

        溶液

        1瓶溶液

        使用方法

        配成溶液后使用

        現配現用

        即開即用

        即開即用

        檢測靈敏度

        很高

        很高

        檢測時間

        較長

        較短

        較短

        最短

        檢測波長

        560-600nm

        420-480nm

        420-480nm

        430-490nm

        細胞毒性

        高,細胞形態完全消失

        很低,細胞形態不變

        很低,細胞形態不變

        很低,細胞形態不變

        試劑穩定性

        一般

        較差

        一般

        很好

        批量樣品檢測

        可以

        非常適合

        非常適合

        非常適合

        便捷程度

        一般

        便捷

        便捷

        非常便捷

        酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾。

        細胞毒性非常低,加入WST-8顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到最佳測定時間。

        常見問題

        一個孔中應接種多少個細胞?

        當使用標準96孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100μl 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100μl 培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK8溶液。

        能否用384孔板進行試驗?

        可以。向各孔中加入培養基體積10%的CCK8溶液,如果加入的CCK8體積太少,可以先將CCK8溶液稀釋1倍,然后加入培養基體積20%的量。

        能否用24孔板進行試驗?

        可以。向各孔中加入培養基體積10%的CCK8溶液。

        酚紅會影響檢測嗎?

        不會。培養基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。

        CCK8與胸苷結合檢測之間是否有相關性?

        有。然而,請注意由于CCK8使用的檢測原理與胸苷檢測的不同,因此結果可能不同。

        CCK8能否檢測細菌細胞?

        可以檢測E.coli,但不能檢測酵母細胞。向100μl E.coli培養液中加入10μl CCK8溶液,并培養1-4個小時或過夜。

        CCK8穩定嗎?

        CCK8在0-5℃下能夠保存至少6個月,在-20℃下避光可以保存1年。如果需要長期保存,我們推薦-20℃的儲藏條件。

        如果沒有450 nm的濾光片,還可以使用哪些其他濾光片?

        還可使用450 nm到490 nm之間的濾光片。

        如何減少由于CCK8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來的誤差?

        可以在加樣前用培養基稀釋CCK8試劑并混勻后加樣。

        CCK8是什么顏色?

        應該是粉紅色。若顏色不一樣,有可能會影響測定。

        CCK8能否對活細胞進行染色?

        不能。因為CCK8的主要成分是一種水溶性的四唑鹽 (WST8),并通過電子載體PMS將活細胞中的電子交換到培養基中的WST8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的,因此CCK8不能對細胞進行染色。

        CCK8檢測溶液對細胞是否有毒?

        CCK8溶液自身因為高濃度的PMS的存在而具有一點毒性。但是,加到培養基中的CCK8是沒有毒性的,因為被稀釋了10倍。因此,長時間的培養,如過夜或者培養數天是可以的。同一個細胞培養液在CCK8檢測后還可以用于其他細胞增殖檢測,如結晶紫檢測,中性紅檢測或者DNA熒光檢測等。由于每種細胞對于CCK8的耐受力都不同,因此在需要進行長時間培養時,先檢測一下細胞在加入CCK8培養后的活力。

        在做加藥實驗時,藥物對測定是否有影響?如何解決?

        有時會有影響。如果藥物具有還原性,會和CCK8發生顯色反應,增加吸光度。解決辦法:首先要確認藥物是否有吸收,在含有藥物的培養基中加入CCK8,測定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養基 (加CCK8)的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK8之前更換培養基,去掉藥物的影響。

        每次測定的數值不一樣,是什么原因?如何解決?

        可能會有以下幾個原因: 1. 當在培養箱內培養時,培養板最外一圈的孔最容易干燥揮發,由于體積不準確而增加誤差。 一般情況下,最外一圈的孔只加培養基,不作為測定孔用。 2. 有可能會因為CCK8沾在壁上而產生誤差,建議在加入CCK8后,輕輕敲擊培養板以幫助混勻。 3. 每孔的細胞數量過多或過少。請預先在1,000-100,000個/孔范圍內摸索條件。

        如何設定空白對照?

        在不含細胞的培養基中加入CCK8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗(細胞毒性實驗)時,還應考慮藥物的吸收,可在不含細胞,加入藥物的培養基中加入CCK8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度作為空白對照。

        哪些物質會影響CCK8的測定?

        當有還原性物質存在時會影響CCK8的測定,例如含有維生素C的Glucose等 (一般培養基中的量不多,酚紅或血清不影響測定)。在有酚紅存在的情況下,會增加空白吸收,但不影響測定,扣除空白吸收即可。

        在實驗中吸光度值太高,如果不能減少細胞數量,如何解決?

        可以縮短加入CCK8后的培養時間。例如:可以把加入CCK8試劑后的培養時間由2小時縮短為1小時。

        設定參比波長的目的是什么?必須設定嗎?

        不一定要設定。CCK8試劑在參比波長沒有吸光度。設定參比波長的目的是為了取出由于樣品混濁所帶來的吸收。

        說明書上僅寫了96孔板的測定方法,如果使用24孔板或12孔板,應該加多少量CCK8試劑?

        一般情況下建議加入CCK8試劑的量是培養基體積的1/10。

        在CCK8顯色過程中,如何終止反應?

        有一下幾種方法(96孔板): ①在顯色反應后,將培養板放置4℃冰箱內。②每孔加10μl 0.1 M HCL溶液。③每孔加10μl的 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸鈉)溶液。注意:反應停止后,應在24小時之內測定。

        必須預培養細胞嗎?

        不一定。如果要向保持細胞的最好狀態,建議預培養細胞。如果不做細胞預培養,細胞內的脫氫酶可能會不穩定。也有人不做細胞預培養,但在做標準曲線和檢測時需要統一檢測條件。

        如果加入的藥物中含有金屬,是否會有影響?

        金屬對CCK8顯色有影響。當終濃度為1 Mm的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%、15%、90%的顯色反應,使靈敏度降級。如果終濃度是10 Mm的話,將會100%抑制。

        CCK8試劑的保存條件?

        在避光條件下CCK8試劑在4℃可保存一年。如果需要保存較長時間的話,推薦在-20℃下保存。但是CCK8若反復解凍和冰凍將會增加空白吸收,從而影響檢測結果,若經常使用可將試劑存放在4℃冰箱內保存。

        預培養后,更換培養基需要細胞計數嗎?

        一般情況下用胰蛋白酶處理對數增長期的細胞,用血球計數盤計數,制備成一定濃度的細胞懸液即可。如果想要精密計數細胞的話,可以預培養后取培養基用血球計數盤進行計數。

        CCK8對于不同的細胞,靈敏度是否一樣?

        不一樣,懸浮細胞與貼壁細胞相比較難染色。對于貼壁細胞,一般加入CCK8培養1-4小時吸光度已經很高,但對于懸浮細胞則可能吸光度較低,可以通過延長CCK8的加入時間或增加細胞數量來解決。

        懸浮細胞和貼壁細胞在數量上有何區別?

        懸浮細胞由于染色比較困那,一般需要增加細胞數量和延長培養時間。貼壁細胞染色比較容易,若細胞數量過大,有時吸光度會超過酶標儀的讀數。

        應該每次做標準曲線嗎?

        建議每次做。雖然細胞是一樣的,但是細胞的狀態不一定一樣,對于狀態不一樣的細胞,建議每次做標準曲線。如果試劑的批號不一樣,靈敏度可能會有輕微的差異,對于不同的批號建議分別做標準曲線。

        有時在藥物作用情況下,細胞已經死亡,但是脫氫酶的活性還在,是否能計算細胞數量?

        不能。由于CCK8是通過和細胞內的脫氫酶進行反應間接反映活細胞數量,如果細胞已經死亡,但脫氫酶的活性還在,則試劑測定的細胞數量將會比真實值高,不能真實反映活細胞數量,建議采用別的方法測定。

        實驗之前,是否需要先檢測一下培養基和CCK8是否會反應?

        需要,可用一個孔檢測一下,因為有培養基中可能含有氧化還原反應的物質,在正式實驗之前有必要先確認培養基和CCK8是否反應。一般正常在的OD值應該在0.4以下。

        如果OD值太低,可以采取什么辦法?

        可以采取2個辦法:① 適當增加細胞數量。② 延長加入CCK8試劑后的染色時間。

        運輸與儲存

        4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存兩年有效。

        安全性

        本品使用安全。如不慎沾染,用清水沖洗即可。

        Material Safety Data Sheets (MSDS)

        質量保證

        吉熒生物對CCK8試劑的每批產品實行嚴格質量檢驗,并進行驗證,以確保產品質量。請用戶使用前務必認真閱讀本手冊。

        使用限制

        本品僅限科研用途。

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